在分子生物学研究的日常工作中,PCR 是最常用也最关键的实验技术之一。从基础的DNA 片段扩增,到复杂的基因克隆、突变分析、测序验证,PCR的准确性和效率直接决定了后续实验的成败。
然而,实验人员往往面临着各种挑战:
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模板复杂,扩增效率低;
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长片段难以获得,易出现片段丢失;
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扩增时间过长,影响整体实验进度;
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错配与突变频率高,影响数据可靠性。
科研人员常常感叹:“PCR才是最考验科研人耐心的环节。”
为了帮助大家解决这一系列难题,近岸蛋白重磅推出新一代高保真PCR预混液——2×NovoFast HiFi Master Mix (Quick Load)(Cat.No.:E185)。它不仅在保真度上达到100倍提升,更能轻松扩增长达40 kb的复杂基因模板,最快扩增速度可达1s/kb,可扩增GC含量高达82.8%的片段,同时对PCR抑制剂具有良好的抵抗能力,适用于1%-20%全血、鼠尾裂解、腐殖酸、细菌等样本的直接PCR,为复杂样本PCR提供可靠解决方案。
五大核心优势
保真性高:保真度为普通Taq酶的100倍
快速高效:2 kb以下片段,延伸速度快至1s/kb
长片段扩增:λDNA、人gDNA扩增可达40kb
灵敏性高:可扩增低至1pg的λDNA
稳定强:室温放置24h,性能不变
性能展示
1 高保真性达100倍

图1. 采用二代测序方法,测定不同聚合酶的扩增保真度。结果显示, 2×NovoFast HiFi Master Mix (Quick Load) 保真度是Taq DNA Polymerase的100倍。
2 快速长片段扩增
复杂模板快速长片段扩增

图2. 20μl扩增体系中,以Human gDNA为模板,扩增1 kb-40 kb片段。结果显示,E185扩增性能优异,扩增速度快,2 kb以内片段延伸速度可达1s/kb,20 kb以内片段延伸速度可达5s/kb。(泳道MK:DNA Ladder 10000,Cat.No.: DM033)
简单模板快速长片段扩增

图3. 20μl扩增体系中,以λDNA为模板,扩增500 bp-40 kb片段。结果显示,E185扩增性能优异,扩增速度快,2 kb以内片段延伸速度可达1s/kb,20 kb以内片段延伸速度可达5s/kb。(泳道MK1:DNA Ladder 2000,Cat.No.: DM005;泳道MK2:DNA Ladder 10000,Cat.No.: DM033)
3 兼容多种特殊样本扩增
1%-20%全血

图4. 以1%-20%全血为模板,扩增2 kb片段。结果显示,E185扩增性能优异,兼容不同血液模板。(泳道MK:DNA Ladder 2000 Plus,Cat.No.: DM006)
菌落直扩

图5. 以大肠杆菌菌落为模板,挑取单菌落扩增2 kb片段。结果显示,E185扩增性能优异,兼容菌落直扩。(泳道MK:DNA Ladder 2000 Plus,Cat.No.: DM006)
鼠尾裂解液直扩

图6. 以鼠尾裂解液为模板,扩增2 kb片段。结果显示,E185扩增性能优异,兼容鼠尾直扩。(泳道MK:DNA Ladder 2000 Plus,Cat.No.: DM006)
腐殖酸抗性

图7. 以Human gDNA为模板,添加不同浓度腐殖酸,扩增1 kb片段。结果显示,E185扩增性能优异,兼容0.05%-0.08%腐殖酸模板。(泳道MK:DNA Ladder 2000,Cat.No.: DM005)
4 片段GC含量最高可达82.8%

图8. 以Human gDNA为模板,扩增不同GC含量片段。结果显示,E185扩增性能优异,兼容不同GC含量片段扩增,特异性高。(泳道MK:DNA Ladder 2000,Cat.No.: DM005)
5 灵敏性最低可达1pg

图9. 以λDNA为模板,扩增4 kb片段。结果显示,E185灵敏度可达1pg。(泳道MK:DNA Ladder 2000 Plus,Cat.No.: DM006)
6 稳定性强

图10. 加热稳定性、室温稳定性和冻融稳定性测试。结果显示,E185在37℃条件下放置7天性能稳定,室温放置24h性能稳定,反复冻融20次性能稳定。(FTC0:冻融0次;FTC20:冻融20次)

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